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液相色譜柱的使用及分類介紹

更新時間:2021-10-14      點擊次數(shù):2548
在選用色譜柱時,應(yīng)充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類數(shù)量、結(jié)構(gòu)特征。根據(jù)化合物的性質(zhì),選擇合適的色譜柱和分析條件。不同類型的色譜柱使用的流動相不同,使用錯誤的流動相會降低柱效,損傷柱子。如分析極性較大的多糖類成分,應(yīng)當采用親水性的反相填料。對于**使用的色譜柱,還應(yīng)按照廠家的出廠說明對色譜柱進行低流速的沖洗活化,活化后的色譜填料共價鍵鍵合力增強,柱效提高,壽命延長。
樣品的準備與預處理
我們的經(jīng)驗是樣品純化得越干凈,色譜柱的使用壽命越長。許多樣品,尤其是生物樣品,組份非常復雜,對色譜柱的損傷性較大,不經(jīng)預處理的樣品直接分析,會嚴重縮短色譜柱的使用壽命。因此,在樣品的準備時需對樣品進行預處理,包括準備溶劑的選擇、樣品過濾等。
制樣溶劑的選擇
制樣溶劑通常需要考慮樣品的溶解性、與流動相的相溶性、色譜填料的適用性等方面。這類溶劑需對樣品有較大的溶解性,而且與流動相溶,洗脫強度*好低于流動相或梯度洗脫中的起始流動相,以免影響樣品分離。目前許多手性色譜柱都禁止使用DMSO、四氫呋喃、氯仿等溶解樣品,這些溶劑會破壞固定相的結(jié)構(gòu),從而縮短色譜柱的使用壽命。此外,制樣溶劑還應(yīng)與色譜系統(tǒng)其他部件如高壓泵、進樣器等相適用。
色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類
①常規(guī)分析柱(常量柱),內(nèi)徑2~5mm,柱長10~30cm;
②窄徑柱(narrowbore),內(nèi)徑1~2mm,柱長10~20cm;
③毛細管柱(又稱微柱microcolumn),內(nèi)徑0.2~0.5mm;
④半制備柱,內(nèi)徑>5mm;
⑤實驗室制備柱,內(nèi)徑20~40mm,柱長10~30cm;
⑥生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達幾十厘米。
色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外,還與填充技術(shù)有關(guān)。在正常條件下,填料粒度>20um時,干法填充制備柱較為合適;顆粒<20um時,濕法填充較為理想。填充方法一般有四種:
①高壓勻漿法,多有用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充;
③軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱;
④干法,柱填充的技術(shù)性強,大多數(shù)實驗室使用己填充好的商品柱。 
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